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ELISA實驗不要疏忽這些操作細節

更新時間:2017-02-05      瀏覽次數:2366

ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。  下面將操作中各個環節常出現問題解決辦法總結如下:試劑要選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。標本收集與保存:避免使用肉眼可見的溶血標本、高脂標本和混濁標本;2-8℃下,標本可放置24-48小時,長期保存需放置-20℃下,請避免反復凍融。  
具體請參照:       
1.洗滌液:用前配制,有的試劑盒會標明,配好的4度下一般可以放一個月,如果沒有標明,盡量用新鮮的,不要多配制;
2.顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制;  
3.標準品:有的試劑盒中標準品是已經配制好的,4度保存,有的是要現配制的,按照說明書操作;  
4.濃縮生物素結合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現配現用(用前15分鐘配制);原則是試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應該現配現用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠;
5.加 樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數據的影響比較大,特別要注意加樣問題。  
不好的操作原因:不會正確使用加樣器; 血清或血漿標本分離不好即進行加樣;手工操作中,加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

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